
一文讀懂藥敏試驗方法有哪些:瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法


藥物敏感試驗簡稱藥敏試驗(或耐藥試驗)。其目的是了解病原微生物對各種抗生素的敏感(或耐受)程度,以指導臨床合理選用抗生素藥物的微生物學試驗。藥敏試驗方法包括:稀釋法(包括瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法)、紙片擴散法、梯度擴散法和自動化儀器法。稀釋法是檢測抗菌藥物敏感性的定量試驗方法,為藥敏試驗的參考方法。
作為第三方檢測中心,中科檢測機構擁有CMA和CNAS認證檢測資質,檢測設備齊全,數據科學可靠,可出具國家認可的藥敏試驗報告。
藥敏試驗瓊脂稀釋法
1、制備初始接種菌懸液
被測菌株和質控菌株配制0.5麥氏濁度單位的菌懸液,作為初始接種物,并按一定順序放入試管架。
2、稀釋接種菌懸液
用無菌肉湯或生理鹽水將初始接種物1:10稀釋,混勻后將稀釋后的接種物按排列順序分別吸取0.1mL至96孔微孔板。
3、 接種菌懸液
a)標記含藥 MHA平皿接種點方向。
b)采用多點接種儀或標準接種環等將稀釋后的接種物按順序分別接種1μL~3μL至無抗菌藥物的生長對照平皿、含梯度藥MHA平皿表面(從低濃度到高濃度)和第二塊生長對照平皿。
c)平皿室溫放置至菌點干燥,但放置時間不超過 30min。
4、 孵育
置于35 ℃±2 ℃空氣環境中孵育16 h~20h。苛養菌的藥敏試驗平皿孵育條件和時間按規定。
5、結果判讀
將平皿置于黑色、無反光背景上讀取結果。以抑制細菌肉眼可見生長的最低濃度為MIC。
藥敏試驗肉湯稀釋法
1、制備初始接種菌懸液
被測菌株和相應質控菌株如大腸埃希菌ATCC25922配制0.5麥氏濁度單位的菌懸液,作為初始接種物菌懸液。
2、稀釋接種菌懸液
用制備的CAMHB肉湯將初始接種物1:100倍稀釋(微量肉湯稀釋法)或1:150倍(宏量肉湯稀釋法)稀釋,混勻。
3、接種菌懸液
a)將稀釋后的接種物按順序依次吸取 0.05m,至1步驟制備的含等量藥 96孔微孔板或吸取1mL,至2步驟制備的含等量藥試管中。
b)稀釋菌液在15min內接種完畢。
c)同時將稀釋后的接種物接種至不含抗菌藥物的非選擇性瓊脂平皿,以檢測接種菌懸液的純度。
d)微量肉湯稀釋法:將稀釋后的菌懸液接種至不含抗菌藥物微孔作為生長對照,同時設置不加接種菌懸液的含藥孔。
e)宏量肉湯稀釋法:設置每一株菌的初始接種物的不含藥的生長對照管。
4、 孵育
接種好的菌液和抗菌藥物混合液置于35℃±2℃孵箱中孵育16h~20 h。苛養菌的藥敏試驗平皿孵育條件和時間按規定。
5、接種菌懸液的菌落計數
每一批試驗應同時進行接種菌懸液的菌落計數,以保證微量肉湯稀釋法和宏量肉湯稀釋法的最終接種菌懸液濃度。
6、結果判讀
a)以抑制細菌肉眼可見生長的最低濃度為 MIC。
b)根據生長對照孔/管菌液生長量判定生長終點。革蘭陽性球菌檢測氣霉素、克林霉素、紅霉素、利奈唑胺和四環素時,易出現拖尾現象,讀取拖尾現象開始的第一個孔的 MIC值,忽略微小菌膜。若存在多孔跳孔現象,需重新檢測。
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